>> 침전 반응
– 수용성 항원이 해당 항체와 반응하여 육안으로 관찰 가능한 침전물을 형성하는 반응
– 작은 항원 입자와 항체가 격자처럼 연결되어 침전물 형성
– 침전반응에 관여하는 항원을 precipitinogen이라 하고, 관여하는 항체를 precipitin이라 한다.
1) 혼합방법
– in vitro에서 항원용액과 항혈청을 혼합하여 침전물의 형성을 관찰하는 방법이다. 항원 입자가 작고 해당 항체가 포함되어 있으면 혼합 용액이 탁해지고 침전물이 육안으로 관찰될 수 있다.
– 이 검사법을 사용할 경우 카디오리핀에 의한 매독진단(VDRA법), CRP검사, b-lipoprotein 검사 등 정성적인 방법이 있다.
2) 레이어 방식
– 모세관에 항혈청을 넣고 그 모세관에 항원용액을 침착하게 겹겹이 쌓은 후 20분, 1시간, 2시간, 3시간, 5시간 경과 후 두 계면에 백탁침강 고리가 관찰되는 방식 .
– 섭입 고리가 이중으로 나타나는 경우가 있는데 이를 이중고리 현상이라고 하며 독립형과 분리형으로 나뉜다.
– 독립형 : 시험관 내에서 두 종류의 항원-항체 반응이 일어나지만 다른 곳에 침강 고리가 형성됨
– 분리형 : 퇴적물 입자의 수나 크기가 다를 때 무거운 퇴적물과 가벼운 퇴적물이 분리되기 때문에 발생한다.
3) 젤에서의 확산 방법
– 한천, 전분 또는 Sephadex와 같은 지지체에 항원과 항체의 확산을 이용하여 침강대를 형성하는 방법
– 단일확산법, 1차원 이중확산법, 2차원 이중확산법, 1차원 방사면역분석확산법, 면역전기영동법 등이 있다.
4) 면역전기영동
– 면역 전기영동은 1953년 Grabar와 Williams에 의해 소개되었으며 Ouchterlony 방법의 변형입니다.
– 전기영동법과 면역확산법을 함께 사용하여 단시간에 많은 성분을 동정할 수 있는 방법으로 감도가 높아 면역학이나 생물학 연구 분야에서 널리 이용되고 있다.
– 역가가 안정적인 항혈청으로 혈장단백을 분획한 결과 30종 이상의 혈장단백이 동정되었다.
>>응집 반응
– 현미경으로 관찰할 수 있을 만큼 큰 항원 입자가 해당 항체와 반응하여 응집체를 형성하는 반응
– 응집 반응에 관여하는 항원을 응집원(agglutinogen)이라고 하며, 응집원은 직접 항원이나 항원이나 항체에 흡착된 입자로 사용될 수 있다.
– 응집 반응에 관여하는 항체를 응집소라고 합니다. 침강 반응과 관련된 항체와 동일합니다.
– 완전항체는 침강반응의 격자이론에서와 같이 두 반응군이 항원결정기군과 결합하여 순차적으로 반응이 일어나 더 큰 덩어리를 형성한다.
– 불완전한 항체는 항원에 결합하더라도 생리식염수에서 응집을 일으키지 못하므로 응집을 위해서는 항글로불린 검사와 같은 특별한 혈청학적 방법이 필요합니다.
1) 세균 응집 반응
– 세균과 그에 상응하는 항체의 반응에 의한 응집반응에는 Widel 검사와 Weil-Felix 반응이 있다.
– 직접 응집 반응이다.
2) 혈구응집 반응
– 혈액형 성분과 항체의 반응에 의한 응집 반응에는 Paul-Bunell 반응, 저온 응집 반응, 혈액형 응집 반응 등이 있습니다.
– 직접 응집 반응이다.
3) 라텍스 응집 반응
– 라텍스 입자에 항원 또는 항체가 흡착되어 일어나는 응집 반응으로 만성 갑상선염, 전신성 홍반성 루푸스, 만성 관절, r-글로불린 반량 및 HCG 검출에 사용됩니다.
4) 카올린 응집체
– 카디오리핀과 레시틴 항원을 카올린 입자에 흡착시켜 매독에 대한 항체를 검출하거나 결핵균의 지질을 흡착시켜 결핵균에 대한 항체를 검출하는데 사용한다.
5) 감자 적혈구 응집 반응
– 토끼에서 양세포를 면역접종하여 얻은 면역혈청에 양세포를 응집이 일어나지 않을 정도로 결합시킨 후 만성류마티스관절염 환자의 혈청에 첨가하면 응집이 일어난다.
6) 면역접착반응
– 항원, 항체, 보체 및 인간적혈구를 혼합하고 거기에서 일정 시간이 지나면 항원, 항체, 보체의 복합체가 인간적혈구에 부착되어 쉽게 응집된다.
7) 교착 상태 응답
– 불활성화된 소혈청 또는 말혈청이 응집을 일으키지 않는 조건에서 적절한 항체에 결합된 적혈구에 첨가될 때 발생하는 반응.
* 항글로불린을 이용한 혈구응집
1) 직접 항글로불린 검사
– 불완전 항체가 적혈구나 혈소판 등 특정 항원에 결합하는지 여부를 검사하는 방법
– 환자의 적혈구를 생리식염수로 세척한 후 항인간글로불린혈청과 반응시키면 불완전한 항체 결합으로 인해 응집이 일어난다.
2) 간접 항글로불린 검사
– 환자의 혈청에서 불완전항체가 생성되고 있는지를 검사하는 방법
– 환자의 혈청과 적혈구, 혈소판 등의 유형물질을 시험관에 넣고 반응시킨 후 글로불린 검사와 같은 방식으로 이러한 유형의 항원과 불완전 항체의 결합을 직접 검사합니다. 이 시점에서 환자의 혈청에 불완전한 항체가 있으면 항원 유형에 감작되고 해당 항원 유형은 항글로불린 검사에 의해 응집됩니다.
3) 단백질 분해 효소를 처리한 적혈구에 의한 간접 글로불린 검사
– 환자 혈청에서 미량의 불완전 항체를 검출하는 방법
4) 항글로불린 소모량 검사
– 불완전항체가 적혈구, 백혈구, 혈소판 등의 항원형에 결합하는지, 또는 환자의 혈청에서 항원형에 대한 불완전항체가 형성되는지 여부를 조사하는 방법
5) 룰로 형성
적혈구가 겹쳐서 결합하여 약한 응집 반응을 보이는 모습